Abstrakt
Stanovení koncentrace
sodíkového kationtu v ředěném séru elektrochemicky pomocí iontově
selektivní elektrody na analyzátoru fy ROCHE Cobas pure.
Seznam souvisejících dokumentů
Uživatelská příručka Roche
Cobas pure
Příbalový
leták ISE
Indirect Na-K-Cl for Gen. 2
OKB PN
– SM – 006 Manipulace se vzorky
OKB PN
– SM – 009 Práce s biologickým materiálem
OKB PN
– SM – 002 Bezpečnost práce
Kódy, názvy, definice a terminologie
Sodíkový kation, sodík,
Na+,
Kód LIS: 23
Seznam zdravotních
výkonů: 81593
Rutinní i statimová
metoda, metoda ISE – indirect stanovení, provádí se na analyzátoru fy ROCHE
Cobas Pure.
Sodium elektrode - ref.č. 10825468001, použitelnost: 2 měsíce
po otevření na palubě analyzátoru v ISE jednotce, popř. na 9000 testů.
Princip a metoda postupu
Iontově selektivní
elektrody využívají unikátní vlastnosti iontově selektivní membrány na vznik
elektrického potenciálu (elektromotorické napětí, EMF), jehož pomocí se měří
koncentrace iontů v roztoku. Selektivní membrána je v kontaktu
s testovaným roztokem i s vnitřním plnícím roztokem. Kvůli
selektivitě membrány přispívají k EMF pouze ionty, které se měří.
Membránový potenciál EMF je daný rozdílem koncentrace testovaného iontu v testovaném
roztoku a ve vnitřním plnícím roztoku. Koncentrace chloridů v séru a v moči se
stanoví elektrochemicky podle Nernstovy rovnice
E= EO + S * log Ci ,
Kde E je rozdíl
potenciálu mezi měrnou a referenční elektrodou EO je standardní potenciál, S je směrnice elektrody,
Ci koncentrace měřeného iontu ve vzorku. Výpočet koncentrace je prováděn pomocí faktoru Sol1F a S –směrnice
elektrody. Pro měření E se používá iontově selektivní elektrody (ISE).
Metoda stanovení Na+
iontově selektivní elektrodou využívá membránový potenciál, který se tvoří na
rozhraní roztoků s rozdílnými
koncentracemi iontu. Podle Nernstovy rovnice závisí tento potenciál na aktivitě
iontů na obou stranách membrány.
Matematické rovnice popisují také chování iontů v roztoku a vztah aktivity
iontů k jejich koncentraci, zahrnují
i iontové síly v plné krvi, plazmě a séru. Výsledná rovnice koreluje všechny
jevy s naměřeným rozdílem potenciálů
mezi vzorkem a standardním roztokem na referenční elektrodě. Tato logaritmická
rovnice je zpracována počítačem
v přístroji a její řešení udává koncentraci chloridů v mmol/l.
Místo provádění postupu
Oddělení klinické biochemie PN v Opavě, Olomoucká 88, 746 01
Opava
Bezpečnostní aspekty a podmínky prostředí
Je nutné dodržovat
obecné zásady bezpečnosti práce podle ČSN 01 8003, ale i zásady práce s
biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých infekcí.
Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné
pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit.
Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou vodou a mýdlem a
ošetřit vhodným reparačním krémem (viz zásady bezpečnosti práce). Při zasažení
očí vymývat velkým množstvím vlažné vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a
kůže odložit veškeré kontaminované oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým
množstvím pokud možno vlažné vody popř. mýdlem nebo jiným vhodným mycím
prostředkem. Po umytí ošetřit vhodným reparačním krémem. Při náhodném požití
vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou pomoc.
Fáze před vyšetřením (příprava pacienta)
Obsah sodíku je v organismu poměrně stálý, příjem z potravy je 140 - 260 mmol/den,
vylučuje se močí, stolicí a potem. Hlavní podíl sodíku je v extracelulární
tekutině, 20 % je v kostech. Pouze z hladiny v séru nelze jednoznačně usuzovat
na normální sodíkovou bilanci v organismu, je nutné znát také stav hydratace,
přívod a vylučování tekutin a elektrolytů a zásobení organismu draslíkem.
Ke změnám v plazmě dochází až po ztrátě 350 - 500 mmol u dospělých.
Zvýšení nastává při dehydrataci z nedostatečného přívodu tekutin nebo z
jejich zvýšených ztrát, při nadměrném přívodu NaCl (např. infúzemi), při
hyperaldosteronismu, Cushingově syndromu, traumatech lebky a vlivem některých
léků (např. antibiotik, podávaných jako sodné soli).
Ke snížení dochází při ztrátách trávicím ústrojím (zvracení nebo odsátí
obsahu, průjem, střevní píštěle, podávání iontoměničů), při renálních ztrátách
(polyurické stadium renálního selhání, po některých diuretikách, při diabetické
acidóze, insuficience nadledvin, hypoaldosteronismus), při ztrátách potem,
zvětšení extracelulárního prostoru při intoxikaci vodou a pneumoniích, také při
těhotenských toxikózách respirační alkalóze, po punkcích rozsáhlého ascitu a u
některých nemocných s karcinomy.
Speciální příprava pacienta ani dieta není nutná, pro obvyklé
vyšetřování je vhodný odběr ráno, na lačno. Odběr se provádí ze žíly.
Odběr primárního vzorku (druh, nádobka, transport)
Pro odběr a
přípravo vzorků používejte pouze vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky.
Stanovení
se provádí v nehemolytickém a nechylózním séru a plazmě. Speciální příprava
pacienta ani dieta není nutná, pro obvyklé
vyšetřování je vhodný odběr ráno, na lačno.
Odběr se
provádí ze žíly.
Pro stanovení chloridů je vhodným vzorkem sérum.
Pro přípravu plazmy je vhodný jen heparin
lithný.
Zkumavky se separačním gelem mohou být
používány pro odběry, ale při dodržování návodu výrobce. Zachovat optimální
promíchání, dobu srážení a minimální výšku hladiny odebrané krve (cca 1 cm) nad
separačním gelem. V případě, že jsou používány sekundární zkumavky,
dodržovat pravidla a čas centrifugace.
Stabilita draslíku ve vzorcích
(sérum nebo plazma) uchovávaných v uzavřených nádobkách:
15 – 25°C 4°C -20°C
14 dnů 14 dnů stabilní
Omezení (interference a zkřížené reakce)
Viz.
Příbalový leták ISE
Indirect Na-K-Cl for Gen. 2, str. 4/8.
Manipulace se vzorky
Podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem.
Přístroje a pomůcky
Analyzátor ROCHE Cobas pure
Reagencie
Nastavení ISE jednotky analyzátoru COBAS Pure je
určeno pro kvantitativní stanovení sodíku, draslíku a chloridů - viz. Příbalový leták ISE Indirect Na-K-Cl
for Gen. 2, str. 2/8.
ISE elektroda K
Reagencie:
ISE Internal Standard Gen. 2
ISE Diluent Gen.
2
ISE reference Elektrolyte
ISE standard
low, high
ISE Cleaning
Solution
ISE
Deproteinizer
Spotřební materiál
Microcups typu Hitachi
Pracovní
postup
ISE modul je součásti
analyzátoru Cobas Pure a před zahájením provozu ISE modulu je nutno provést
kontrolu stavu roztoků. Na zahájení provozu je třeba umístit do
analyzátoru kalibrační stojánek 001, kde v pozici 1 – ISE standard low, a
v pozici 2 a 3 – ISE standard high. Po provedení úspěšné kalibrace
provedeme kontrolu kvality. Pipetuje se 15 ul vzorku.
Stručný
popis postupu
Obsluha provede kontrolu
reagencií, kalibraci metod a následnou kontrolu metod (kontrolu provádí
vysokoškolský určený pracovník). Analyzovaný materiál se umístí do určených
stojánků dle matrice analyzovaného materiálu označený čárovým kódem. Požadavky
analýz se předají do cobas pure on-line přes čárový kód z LIS a po
provedení analýzy se převedou elektronicky zpět. Tyto výsledky jsou uchovávány
v laboratorním systému LIMS fy DS Soft Olomouc.
Kalibrace
a návaznost
Na
kalibraci ISE používáme reagencie: ISE Standard low, ISE standard high, které
dáváme do předem nadefinovaných pozic do kalibračního stojánku 001, kde
v pozici 1 – ISE standard low, a v pozici 2 a 3 – ISE standard high.
Po provedení úspěšné kalibrace provedeme kontrolu kvality.
Charakteristika spolehlivosti
Viz.
Příbalový leták ISE
Indirect Na-K-Cl for Gen. 2, str. 4 - 5/8.
Dokumentace, výpočty, zpracování dat a vydávání výsledků
Hodnoty
poslední provedené kalibrace se uchovávají v paměti přístroje. V případě
potřeby je možné je vytisknout.
Záloha veškerých primárních dat (kalibrace,
kontrolní vzorky, pacientské vzorky) probíhá na analyzátoru Cobas pure každý
den automaticky na flash disk umístěný v počítači analyzátoru a sekundární
data (pacientské vzorky, QC) jsou zálohovány v LIS taktéž každý den
automaticky probíhající zálohou LIS.
Referenční, varovné nebo kritické hodnoty
Sérum a
plazma (mmol/l) 136
- 145
Interpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášení
Hodnoty se udávají v
mmol/l, po kontrole na oddělení. Výsledky se vydávají
v elektronické a i papírové podobě, statimové a kritické výsledky
podléhající hlášení jsou hlášeny telefonicky.
Řízení kvality
Jako kontrolní materiál se používá PreciControl ClinChem
Multi 1 a PreciControl ClinChem Multi 2 fy ROCHE, lyofilizované kontrolní séra
na základě bovinního albuminu se základními aktivitami v normálním rozmezí.
Přidané enzymy zvířecího původu mají vlastnosti podobné enzymům z lidského
séra.
Připravují se dokonalým rozpuštěním obsahu
lahvičky v 5 ml deionizované vody za pomalého kroužení. Po 5 minutách jsou
připraveny k použití, pro stanovení ALP se nechává stát další 1 hodinu při
laboratorní teplotě. Používají se stejným způsobem jako vzorek, datum exspirace
je udáno na každém balení.
Do měření se zařazují každý den a výsledky jsou
vyhodnoceny podle Westgardových pravidel v analyzátoru v QC modulu a
taktéž v LIS v QC modulu. Veškeré NO v QC jsou zdokumentovány
v LIS.
Externí kontrola kvality v rámci České republiky
je organizována SEKK a naše laboratoř se jí účastní 2- krát ročně v rámci
cyklu AKS.
Poznámky, zdroje variability
Jiné související informace
Literatura
·
Uživatelská
příručka Cobas pure
·
Racek, J.
Klinická biochemie, Galén, 2021
·
Richard
Češka a kol.: Interna. 1. Praha: Triton 2010
·
Příbalový
leták ISE Indirect Na-K-Cl for Gen. 2
Appendixy
Autorské poznámky
Recenze,
schválení
Autor a
spoluautoři: Stanovská Lenka
Recenze:
Revize: