Abstrakt
Stanovení terapeutické hladiny kyseliny valproové v séru
technikou homogenního enzymového stanovení soupravou VALP2 ROCHE na analyzátoru Cobas pure.
Seznam souvisejících dokumentů
Uživatelská
příručka Roche Cobas pure
Bezpečnostní list Roche
VALP2
Příbalový leták VALP2 –
cobas pure
OKB PN – SM – 006
Manipulace se vzorky
OKB PN – SM – 009 Práce
s biologickým materiálem
OKB PN – SM – 002
Bezpečnost práce
Kódy,
názvy, definice a terminologie
Kyselina valproová, kyselina
2-propylpentanová, kyselina dipropyloctová,
VALP, LIS –353, VZP 99139
Rutinní a statimová metoda, používá se kazeta COBAS Pure
Valproic Acid (VALP), obsahuje diagnostické reagencie určené pro in vitro kvantitativní stanovení
kyseliny valproové v séru nebo v plasmě systémem COBAS pure (test VALP2,
test ID 2120 001), katalogové číslo 08445575190. Souprava obsahuje 200 testů a
nachází se v místnost biochemie.
Princip a metoda postupu
Stanovení je
založeno na technice homogenního enzymového imunostanovení, použité pro
kvantitativní analýzu kys. valproové (volné i vázané na protein) v lidském
séru nebo plazmě. Stanovení je založeno na kompetici o vazebná místa protilátek
mezi léčivem ve vzorku a léčivem označeným enzymem glukóza-6-fosfatázadehydrogenáza
(G6PDH). Aktivita enzymu klesá po navázání na protilátku, což umožňuje, aby
byla koncentrace ve vzorku měřena na základě aktivity enzymu. Aktivní enzym
přemění zoxidovaný nikotinamidadenindinukleotid (NAD) na NADH, což způsobí
změnu absorbance, která se měří spektrofotometricky. Endogenní sérum G6PDH
neinterferuje, protože koenzym pracuje pouze s bakteriálním enzymem
použitým ve stanovení.
Místo provádění postupu
Oddělení klinické biochemie PN Opava, Olomoucká
88, Opava 746 01
Bezpečnostní
aspekty a podmínky prostředí
Je nutné dodržovat
obecné zásady bezpečnosti práce podle ČSN 01 8003, ale i zásady práce s
biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých infekcí.
Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné
pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit.
Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou vodou a mýdlem a
ošetřit vhodným reparačním krémem (viz zásady bezpečnosti práce). Při zasažení
očí vymývat velkým množstvím vlažné vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a
kůže odložit veškeré kontaminované oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým
množstvím pokud možno vlažné vody popř. mýdlem nebo jiným vhodným mycím
prostředkem. Po umytí ošetřit vhodným reparačním krémem. Při náhodném požití
vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou pomoc.
Fáze před vyšetřením (příprava pacienta)
Kyselina valproová (kyselina dipropyloctová) je primárně
užívána v léčbě záchvatů petit mal a jiných generalizovaných i lokálních
záchvatech. Protože se však projevuje i nepříznivými reakcemi, je důležité
monitorovat její hladiny v průběhu terapie. Kyselina valproová, mastná
kyselina s větveným koncem, je z 90% vázaná na proteiny, především na
albumin. Rozličné faktory, včetně hladiny sérového albuminu, celkové
koncentrace léčiva, hladina volných mastných kyselin, použití víve léčiv a
různé fyziologické podmínky významně ovlivňují tuto vazbu. Výsledkem jsou
pochopitelně inter- i intraindividuální rozdíly ve velikosti volné /nevázané),
biologicky aktivní frakci kyseliny valproové. Za těchto podmínek je sledování
volné kyseliny valproové samozřejmostí a je metodou volby za všech okolností.
Odběr primárního vzorku (druh, nádobka, transport)
Pro odběr a přípravu vzorků používejte pouze
vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky. Uvedené druhy vzorků byly testovány
s vybranými typy odběrových zkumavek, které byly komerčně dostupné
v té době, tzn, že do testu nebyly zahrnuty všechny typy zkumavek všech
výrobců. Systémy odběru vzorků různých výrobců mohou obsahovat různé materiály,
které mohou mít v některých případech vliv na výsledky. Při zpracování
vzorků v primárních zkumavkách dodržujte pokyny jejich výrobce.
Stanovení se provádí v nehemolytickém séru nebo
v plazmě (Li-heparinizovaná, Na-heparinizovaná, K2-, K3-EDTA).
Speciální příprava pacienta ani dieta není nutná.
Odběr se provádí ze žíly.
Obvyklá doba odběru
v závislosti na dávkování a velikosti dávek léčiva.
Vzorky obsahující precipitáty,
centrifugujte před provedením testu.
Stabilita: 2 dny při 15 – 25 °C.
Musí-li být vzorky uskladněny pro pozdější testování, měly by být uloženy
uzavřené při 4 – 8 °C po dobu max. 7 dní nebo při – 20°C po dobu max. 3 měsíců.
Zabraňte opakovanému mrazení a rozmrazování. Rozmrazené vzorky před použitím
několikrát promíchejte obracením.
Omezení (interference a
zkřížené reakce)
Viz. Příbalový leták VALP2, str. 2/5
Manipulace se vzorky
Podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem.
Přístroje a pomůcky
Analyzátor ROCHE Cobas pure – viz. SOPT Cobas pure.
Reagencie
Souprava Obsahuje
·
činidla R1
(v pozici B)
·
činidlo R3
(v pozici C)
Doba skladování: při 2 – 8 °C – dle datumu exspirace reagencie, při
otevření na palubě v chlazeném prostoru analyzátoru 18 týdnů.
Činidlo R1 Reagencie s protilátkou
Monoklonální
protilátka proti kyselině valproové (myší) v pufru, G6P, NAD
a
hovězí sérový albumin v pufru, konzervans
Činidlo R3 Značkovač
Kyselina valproová
značená bakteriálním G6PDH a hovězí sérový albumin v pufru, konzervans
Spotřební materiál
Microcups typu Hitachi
Pracovní postup
Kazetu Cobas
pure VALP2 umístíme do prostoru pro reagencie. Připravíme kontrolní séra, které
umístíme do příslušného stojanu do předem definovaných pozic a po ukončení
měření QC modul v analyzátoru a také v LIS vyhodnotí výsledky pomocí
Westgardových pravidel a určený pracovník, který rozhodne, zda odpovídající
analýza může probíhat. Celková koncentrace se zjistí výpočtem podle optimální
kalibrační křivky pomocí software analyzátoru.
Stanovení je
měřeno při 37 °C při primární vlnové délce A/B 415/340 nm. Při
koncentraci vyšší než měřící rozsah je výsledek označen kódem pro opakování
měření z naředěného vzorku. Pipetuje se 1,5 µl séra.
Stručný popis postupu
Obsluha
provede kontrolu reagencií, kalibraci metod a následnou kontrolu metod
(kontrolu provádí vysokoškolský určený pracovník). Analyzovaný materiál se
umístí do určených stojánků dle matrice analyzovaného materiálu označený
čárovým kódem. Požadavky analýz se předají do cobas pure on-line přes čárový
kód z LIS a po provedení analýzy se převedou elektronicky zpět. Tyto
výsledky jsou uchovávány v laboratorním systému LIMS fy DS Soft Olomouc.
Kalibrace a návaznost
Režim kalibrace je nelineární.
Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle
USP referenčních standardů. Kalibrátory jsou připravovány tak, aby obsahovaly
známé množství kyseliny valproové v normálním lidském séru.
Frekvence kalibrace: po změně šarže reagencie,
podle požadavků provádění kontroly kvality, dané frekvence buď plných nebo jen
2-bodových kalibrací jsou taktéž předvoleny v software analyzátoru.
Kalibrátory jsou již připraveny k použití.
Kalibrátor je stabilní do data uvedeného na obalu.
Kalibrátor byl připraven z krve dárců, testovaných individuálně na
přítomnost HBsAG, HCV a HIV protilátek. Je nutné s ním zacházet dle pravidel o bezpečnosti
práce s biologickým materiálem.
Koncentrace se vybírá v přiloženém atestu ke
kalibrátoru a závisí na šarži a metodě. Kalibrace může být plná –
6-bodová, nebo jen 2-bodová, závislost je nelineární. Rekalibrace
metody se provádí na základě výsledků kontroly správnosti. Kalibrační
data jsou automaticky archivována v softwaru analyzátoru.
Charakteristika spolehlivosti
Měřící rozsah: 19 - 1040 umol/l
Mez
detekce: 19,4 umol/l
Mez detekce představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze
odlišit od nulového kalibrátoru s 95 % pravděpodobností.
Mez stanovitelnosti:
41,6 umol/l
Mez stanovitelnosti je nejnižší koncentrace analytu, kterou lze
reprodukovatelně měřit s celkovou chybou 20 %. Stanovena byla použitím
vzorků kyseliny valproové s nízkými koncentracemi.
Dokumentace,
výpočty, zpracování dat a vydávání výsledků
Hodnoty
poslední provedené kalibrace se uchovávají v paměti přístroje. V případě potřeby je možné je vytisknout.
Záloha
veškerých primárních dat (kalibrace, kontrolní vzorky, pacientské vzorky)
probíhá na analyzátoru Cobas pure každý den automaticky na flash disk umístěný
v počítači analyzátoru a sekundární data (pacientské vzorky, QC) jsou
zálohovány v LIS taktéž každý den automaticky probíhající zálohou LIS.
Referenční, varovné nebo kritické hodnoty
Terapeutické rozmezí kyseliny
valproové v séru je 50 - 100 mg/ml (347 – 693 umol/l). Hranice toxicity leží u
hodnoty koncentrace 1040 mmol/l.
Mezi nepříznivé vedlejší účinky terapie kyselinou valproovou patří jaterní
dysfunkce, nausea, zvracení, nechutenství, malátnost, strnulost a u některých
případech může vyvolat psychiatrické obtíže.
Interpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášení
Hodnoty se udávají v umol/l, po kontrole na oddělení. Výsledky se vydávají
v elektronické a i papírové podobě, statimové a kritické výsledky
podléhající hlášení jsou hlášeny telefonicky.
Řízení kvality
Jako kontrolní materiál správnosti metody se používají TDM Control
Set Level I, II, III. fy ROCHE. Do měření
se zařazují dle Směrnice pro IKK. Kontrolu provádí vysokoškolský pracovní podle
Westgardových pravidel a v případě
nevyhovující kvality podniká určitá opatření (kalibrace, nové reagencie, a
pod).
EHK
Externí kontrola kvality v rámci České republiky je organizována SEKK,
laboratoř se jí účastní 2x ročně
v rámci cyklu TDM.
Poznámky, zdroje variability
Konverzní faktor: ug/ml * 6,93 = umol/l
Jiné související informace
Vzorek,
jehož výsledek je vyšší, než je hodnota nejvyššího kalibrátoru, je systémem
označen a musí se ručně naředit nulovým kalibrátorem.
Literatura
·
Uživatelská
příručka Cobas pure
·
Racek, J.
Klinická biochemie, Galén, 2021
·
Richard
Češka a kol.: Interna. 1. Praha: Triton 2010
Appendixy
Autorské poznámky
Doporučení, recenze, schválení
Autor a spoluautoři: Stanovská Lenka
Vyjádření:
Revize: