OSN-SAbstraktOSN-E

Semikvantitativní stanovení kanabinoidů soupravou THC2 ROCHE na analyzátoru Cobas Pure.

OSN-SSeznam souvisejících dokumentůOSN-E

Uživatelská příručka Roche Cobas pure

Bezpečnostní list Roche THC2

Příbalový leták THC2 – cobas pure

OKB PN – SM – 006 Manipulace se vzorky

OKB PN – SM – 009 Práce s biologickým materiálem

OKB PN – SM – 002 Bezpečnost práce

OSN-SKódy, názvy, definice a terminologieOSN-E

Kanabinoidy, THC, LIS - 373, VZP 92133, statim 92135

Kazeta COBAS Pure THC2 obsahuje diagnostické reagencie určené pro in vitro semikvantitativní stanovení kannabinoidů v moči systémem COBAS Pure, katalogové číslo 08058644190, ID 2107 001. Z nabízených alternativ měření stanovujeme test TH2S2, ACN 21073, test pro semikvantitativní stanovení, cut-off 20 ng/ml.

Souprava je umístěna v lednici, místnost biochemie. Souprava obsahuje 850 testů.

Princip odpovídá metodě doporučené SKB ČLS JEP a IFCC.

OSN-SPrincip a metoda postupuOSN-E

Je založena na kinetické interakci mikročástic v roztoku (KIMS – kinetic interaction of microparticles in a solution) a následným měřením propustnosti světla.

V případě absence drogy ve vzorku se volný konjugát váže na protilátku, vázanou na mikročástici, a vytváří agregáty. S probíhající agregací v případě absence léčiva ve vzorku absorbance roste.

Jestliže vzorek moči obsahuje příslušnou drogu, probíhá kompetice drogy s konjugátem derivátu drogy o protilátku vázanou na mikročástice. Protilátka vázaná na léčivo ve vzorku není již dostupná pro podporu agregace částic a následný vznik struktury částic je inhibován. Přítomnost léčiva ve vzorku úměrně snižuje nárůst absorbance vůči koncentraci léčiva ve vzorku. Obsah léčiva ve vzorku se měří poměrem ke známé hodnotě cut-off koncentrace léčiva.

OSN-SMísto provádění postupuOSN-E

Oddělení klinické biochemie PN v Opavě, Olomoucká 88, 746 01 Opava.

OSN-SBezpečnostní aspekty a podmínky prostředíOSN-E

Je nutné dodržovat obecné zásady bezpečnosti práce podle ČSN 01 8003, ale i zásady práce s biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých infekcí. Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit. Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou vodou a mýdlem a ošetřit vhodným reparačním krémem (viz zásady bezpečnosti práce). Při zasažení očí vymývat velkým množstvím vlažné vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a kůže odložit veškeré kontaminované oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým množstvím pokud možno vlažné vody popř. mýdlem nebo jiným vhodným mycím prostředkem. Po umytí ošetřit vhodným reparačním krémem. Při náhodném požití vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou pomoc.

OSN-SFáze před vyšetřením (příprava pacienta)OSN-E

Hlavní psychoaktivní látka:

Δ⁹-tetrahydrokanabinol (THC):

Hlavní metabolity:

11-OH-Δ⁹-tetrahydrokanabinol:

11-nor-Δ⁹-tetrahydrokanabinol-9-karboxylová kyselina:

Synonyma: tráva, joint, marihuana, marjánka, grass, smoke, weed

Za základní psychoaktivní komponentu v rostlině konopí Cannabis sativa se obecně považuje D⁹ tetrahydrocannabinol (D⁹ THC) i přesto, že k psychologickému a fyziologickému působení marihuany přispívají i ostatní kannabinoidy. Akutním účinkem použití marihuany je zhoršení paměti, špatné odhadování času, poruchy vědomostí, poruchy motorických dovedností a depersonalizace. Tyto účinky se projevují i u chronických narkomanů, kde mohou být navíc i vlivy kardiovaskulární, plicní a reprodukční.

Marihuana je nejčastěji užívána v podobě kouření, může však docházet i k jejímu požívání a to v podobě příměsí v potravě, nebo tekutých extraktech (čaj). Do krve se marihuana z plic vstřebává poměrně rychle a ihned nastupuje její účinek. Při požití je nástup účinku pomalejší, ale dlouhodobější. Přírodní kannabinoidy a jejich metabolity jsou rozpustné v tucích, a proto jsou v lidském těle kumulovány v tukové tkáni včetně tkáně mozkové ještě dlouho po požití.

Metabolity kannabinoidů lze nalézt v krvi, žluči, stolici a moči. V moči mohou být detekovány již v několika hodinách po požití. Vlivem rozpustnosti v tucích zůstávají dlouho v tukových tkáních, odkud se pomalu uvolňují a vylučují močí. To může trvat dny, týdny i měsíce po posledním požití a závisí to na intenzitě a frekvenci užívání.

Hlavními komponentami vylučovanými močí, které se používají k detekci užívání marihuany, jsou hlavně D⁹ THC a 11-nor-D⁹-THC-9-karboxylová kyselina (D⁹ COOH-THC).

OSN-SOdběr primárního vzorku (druh, nádobka, transport)OSN-E

Vzorky moče odebírejte do čistých skleněných nebo plastových nádobek.

Čerstvá moč nevyžaduje žádné zvláštní zacházení nebo předúpravu. pH vzorků by se mělo pohybovat v rozsahu normálních fyziologických hodnot 5 – 8. Žádné přídavné látky ani konzervační látky nejsou nutné. Je doporučeno uchovávat odebrané vzorky při 2 - 8°C a analýzu provést do 5 dnů od odběru. Pro dlouhodobé uchování je třeba vzorky zmrazit.

Velmi zakalené vzorky zcentrifugujte.

OSN-SOmezení (interference a zkřížené reakce)OSN-E

Viz. Příbalový leták THC2, str. 3/7.

OSN-SManipulace se vzorkyOSN-E

Podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem.

OSN-SPřístroje a pomůckyOSN-E

Analyzátor ROCHE Cobas pure.

OSN-SReagencieOSN-E

Souprava obsahuje:

· činidla R1 (v pozici B)

· činidla R3 (v pozici C)

Činidla R1 (pozice B) Mikročástice s konjugovaným derivátem kanabinoidu, pufr, hovězí

sérový albumin, 0,09 % azid sodný

Činidla R2 (pozice C) Roztok mikročástic: mikročástice s navázanými protilátkami proti THC

(myší poloklonální), pufr, hovězí sérový albumin, 0,09 % azid sodný

V neotevřeném stavu při 2 - 8 °C jsou roztoky stabilní do data exspirace vyznačeného na štítku reagencie. Roztoky jsou připraveny k použití. Po instalaci na palubu přístroje v chlazeném prostoru jsou stabilní 8 týdnů.

OSN-SSpotřební materiálOSN-E

Microcups typu Hitachi.

OSN-SPracovní postupOSN-E

Kazetu Cobas pure THC2 umístíme do prostoru pro reagencie. Připravíme kontrolní séra, které umístíme do příslušného stojanu do předem definovaných pozic a po ukončení měření QC modul v analyzátoru a také v LIS vyhodnotí výsledky pomocí Westgardových pravidel a určený pracovník, který rozhodne, zda odpovídající analýza může probíhat. Celková koncentrace se zjistí výpočtem podle optimální kalibrační křivky pomocí software analyzátoru.

Stanovení je měřeno při 37 °C při primární vlnové délce A/B -/570 nm. Při koncentraci vyšší než měřící rozsah je výsledek označen kódem pro opakování měření z naředěného vzorku. Pipetuje se 3,2 µl séra.

OSN-SStručný popis postupuOSN-E

Obsluha provede kontrolu reagencií, kalibraci metod a následnou kontrolu metod (kontrolu provádí vysokoškolský určený pracovník). Analyzovaný materiál se umístí do určených stojánků dle matrice analyzovaného materiálu označený čárovým kódem. Požadavky analýz se předají do cobas pure on-line přes čárový kód z LIS a po provedení analýzy se převedou elektronicky zpět. Tyto výsledky jsou uchovávány v laboratorním systému LIMS fy DS Soft Olomouc.

OSN-SKalibrace a návaznostOSN-E

Ke kalibraci se využívá přípravek:

Semikvantitativní stanovení: Preciset DAT Plus II CAL, kat. č. 03304680190.

CAL 1 – 5. Připraveny k použití. Stabilní v lednici při 2 – 8 °C do data exspirace na štítku reagencie.

Mód kalibrace: nelineární

Frekvence kalibrace: po změně šarže reagencií, pokud to vyžadují procesy IKK

Návaznost: Tato metoda byla standardizovaná dle primární referenční metody (GC-MS).

Kalibrátor byl připraven z krve dárců testovaných individuálně na přítomnost HBsAG, HCV a HIV protilátek. Je nutné s ním zacházet podle pravidel o bezpečnosti práce s biologickým materiálem.

OSN-SCharakteristika spolehlivostiOSN-E

Správnost testu řešena pro moč na str. 4/7 příbalového listu THC2.

OSN-SDokumentace, výpočty, zpracování dat a vydávání výsledkůOSN-E

Hodnoty poslední provedené kalibrace se uchovávají v paměti přístroje. V případě potřeby je možné je vytisknout.

Záloha veškerých primárních dat (kalibrace, kontrolní vzorky, pacientské vzorky) probíhá na analyzátoru Cobas pure každý den automaticky na flash disk umístěný v počítači analyzátoru a sekundární data (pacientské vzorky, QC) jsou zálohovány v LIS taktéž každý den automaticky probíhající zálohou LIS.

OSN-SReferenční, varovné nebo kritické hodnotyOSN-E

Analyzátor COBAS Pure:

Hodnota cut-off testu: 20 µg/l.

0 – 19 µg/l – negativní

20 a víc µg/l – pozitivní

OSN-SInterpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášeníOSN-E

Hodnoty se udávají v µg/l, po kontrole na oddělení. Výsledky se vydávají v elektronické a i papírové podobě, statimové a kritické výsledky podléhající hlášení jsou hlášeny telefonicky.

OSN-SŘízení kvalityOSN-E

Jako kontrolní materiál se používají Control Set DAT II., kat.č. 03304680190 (fy ROCHE). Používají se stejným způsobem jako vzorek, expirace je udána na každém balení. Do měření se zařazují dle Směrnice pro IKK. Kontroly správnosti vyhodnocuje laborant na úseku biochemie, který v případě nevyhovující kvality podniká určitá opatření: výměnu reagencií, novou kalibraci a následnou kontrolu správnosti metody, kontrolu dávkovacího a fotometrického zařízení analyzátoru atd. Výsledky kontrol jsou průběžně ukládány do paměti analyzátoru a také do LIS do QC modulu.

EHK

Externí kontrola kvality v rámci České republiky je organizována RfB a naše laboratoř se jí účastní 2x do roka v rámci cyklu DS.

OSN-SPoznámky, zdroje variabilityOSN-E

OSN-SJiné související informace

Uvádí se, že THC a jeho deriváty se mohou adsorbovat na povrch plastů použitých odběrových zkumavek a snížit tak koncentraci drog ve vzorku.

OSN-SLiteraturaOSN-E

· Příbalový leták THC2

· Uživatelská příručka Cobas pure

· Racek, J. Klinická biochemie, Galén, 2021

· Richard Češka a kol.: Interna. 1. Praha: Triton 2010

OSN-SAppendixyOSN-E

OSN-SAutorské poznámkyOSN-E

OSN-SDoporučení, recenze, schváleníOSN-E

Autor a spoluautoři: Stanovská Lenka

Vyjádření:

Revize: