Abstrakt
Stanovení hořčíku fotometricky v séru soupravou MG2 na analyzátoru
Roche Cobas pure.
Seznam souvisejících dokumentů
Uživatelská příručka Roche Cobas pure
Bezpečnostní list Roche
MG2
Příbalový leták MG2 –
cobas pure
OKB PN – SM – 006
Manipulace se vzorky
OKB PN – SM – 009 Práce
s biologickým materiálem
OKB PN – SM – 002
Bezpečnost práce
Kódy, názvy, definice a terminologie
Hořčík, Mg, Magnézium, Mg2+, kation hořečnatý
Kód LIS: 29, Seznam zdravotních výkonů: 81465
Rutinní i statimová metoda, používá
se kazeta COBAS Pure Magnesium (MG2), která obsahuje
diagnostické reagencie určené pro in
vitro kvantitativní stanovení koncentrace hořčíku v séru, plasmě a
moči systémem COBAS Pure aplikace pro sérum a plazmu (test MG2) firmy katalogové číslo 08058016190, která obsahuje 690
testů ve dvou pozicích B, C. ID 2089 001. Souprava je uložena v lednici,
místnost biochemie. Princip odpovídá metodě doporučené SKB ČLS JEP a IFCC.
Princip a metoda postupu
Fotometrická endpoint metoda.
Vzorek a přidání R1 – TRIS/6-aminokaproová kys. Pufr: 500 mmol/l, pH
11.25, EGTA, 129 umol/l, stabilizátor.
Přidání R3 a zahájení reakce, R3 – xylidylová
modř, 0,28 mmol/l, detergent, konzervans
Princip: V alkalickém roztoku vytváří
hořčík s xylidolovou modří nachově zabarvený komplex diazoniové soli.
Koncentrace Mg je změřena fotometricky na základě poklesu absorbance xylidylové
modři.
R1 je v pozic B a R3 je v pozici C.
Místo provádění postupuOSN-E
Oddělení klinické biochemie PN v Opavě, Olomoucká 88, 746 01 Opava.
Bezpečnostní aspekty a podmínky prostředí
Je nutné dodržovat obecné zásady bezpečnosti práce podle ČSN 01 8003, ale i zásady práce s
biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých infekcí. Zejména je třeba
zachovávat pravidla osobní
hygieny, používat osobní ochranné pracovní prostředky (oděv, obuv a
podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit. Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou
teplou vodou a mýdlem a ošetřit vhodným reparačním krémem (viz zásady bezpečnosti práce). Při zasažení očí vymývat velkým množstvím vlažné vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a
kůže odložit veškeré kontaminované oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým množstvím pokud
možno
vlažné vody popř. mýdlem nebo jiným vhodným mycím prostředkem. Po mytí
ošetřit
vodným reparačním krémem. Při náhodném požití vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou pomoc.
OSN-SFáze před vyšetřením
(příprava pacienta)
Hořčík je čtvrtým z nejčetněji zastoupených
kationů v lidském těle. Přibližně z 50% je vázán v kostech
s vápníkem a fosfáty. Většina zbývajícího hořčíku se vyskytuje
intracelulárně a jen malé množství se nachází v extracelulární tekutině.
Hořčík slouží jako aktivátor v různých fyziochemických procesech
zahrnujících fosforylaci, syntézu bílkovin a metabolizmus DNA. Podílí se na
neuromuskulární vodivosti a dráždivosti skeletálního a srdečního svalstva.
Strávený hořčík je absorbován ve tenkém střevě a jeho
množství je v obráceném poměru k celkovému příjmu. Homeostázi účinně
kontrolují ledviny prostřednictvím tubulární resorpce, čímž umožní zadržet
potřebné množství hořčíku v případech nedostatečného příjmu potravou a naopak.
Zvýšené hodnoty hořčíku provázejí selhání ledvin,
akutní diabetickou acidózu, dehydrataci a Addisonovu chorobu. Hypermagnezémie
má tlumivý efekt na CNS, způsobuje celkovou anestézii a respirační selhání.
Modifikuje vedení vzruchu v srdečním svalu a může vést k jeho zastavení.
Hypomagnezémie je pozorována při chronickém alkoholizmu, malabsopci, diarhee,
akutní pankreatitidě, diuretické terapii, prolongované parenterální výživě bez
suplementace hořčíkem a poruchách funkce ledvin (glomerulonefritis, defekt
tubulární resopce). Snížená hladina hořčíku v séru může vyústit
v křeče, konvulzi a srdeční arytmii.
Hořčík v moči je stanovován pro detekci jeho
deplece.
Odběr primárního vzorku (druh, nádobka, transport)
Pro odběr a přípravu vzorků používejte pouze vhodné zkumavky nebo
odběrové nádobky.
Stanovení se provádí v nehemolytickém séru, plazmě (Li, heparin) a moči. Speciální příprava pacienta
není nutná, pro obvyklé vyšetřování je vhodný odběr ráno, na lačno, v končetině nesmí dojít k venostáze.
Odběr krve se provádí ze žíly.
Nehemolytické sérum odebrané bez
venostázy je optimální vzorek. Sérum s viditelnou hemolýzou nemá být
zpracováváno, neboť erytrocyty obsahují velké množství hořčíku. Sérum má být
neprodleně separováno od krevního koláče, aby nemohl hořčík pronikat
z erytrocytů do séra. Použitelný antikoagulans je heparin. EDTA plazma
nebo plazma pacientů požívajících EDTA je nevhodná pro stanovení hořčíku,
protože tato složka vytváří cheláty a znemožňuje reakci. Fluorid sodný a oxalát
rovněž nejsou vhodné kvůli interferencím s reakcí.
Hořčík ve vzorcích séra a plazmy je
7 dní stabilní, jestliže je skladován při 2 – 8°C a taktéž 7 dní při 15 – 25
°C, 1 rok při (-15) ) - (-25) °C.
Moč má být sladována v nádobách
bez kovů. Vzorky okyselit kyselinou chlorovodíkovou
(pH < 1,0) jako prevenci před
precipitací fosfátů hořečnatoamonných.
Vzorky močí jsou automaticky
předředěny analyzátorem pomocí 0,9 % NaCl.
Omezení (interference a zkřížené reakce)
Viz. Příbalový leták MG2, str. 3/5.
Manipulace
se vzorky
Podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem.
Přístroje a pomůcky
Analyzátor ROCHE Cobas Pure – ciz. SOPT Cobas Pure.
Reagencie
Souprava obsahuje:
·
činidla
R1
·
činidlo R3
Činidla R1 (v pozici B) – složení viz. princip metody.
Činidlo R2 (v pozici C) - složení viz. princip metody.
Činidla jsou stabilní do vyznačené doby exspirace při skladování při 15 -
25 °C a v přístroji na palubě v chlazeném prostoru po dobu 26 týdnů.
Příprava pracovních roztoků:
Kazeta je připravena k okamžitému použití.
Likviduje se běžným způsobem podle místních předpisů.
Spotřební materiál
Microcups typu Hitachi.
Pracovní postup
Kazetu Cobas pure MG2 umístíme do prostoru pro reagencie. Připravíme
kontrolní séra, které umístíme do příslušného stojanu do předem definovaných
pozic a po ukončení měření QC modul v analyzátoru a také v LIS vyhodnotí
výsledky pomocí Westgardových pravidel a určený pracovník, který rozhodne, zda
odpovídající analýza může probíhat. Celková koncentrace se zjistí výpočtem
podle optimální kalibrační křivky pomocí software analyzátoru.
Stanovení je měřeno při 37 °C při primární vlnové délce A/B 505/600 nm. Při koncentraci
vyšší než měřící rozsah je výsledek označen kódem pro opakování měření z
naředěného vzorku. Pipetuje se 2,4 µl séra.
Stručný popis postupu
Obsluha provede kontrolu reagencií, kalibraci metod a následnou kontrolu
metod (kontrolu provádí vysokoškolský určený pracovník). Analyzovaný materiál
se umístí do určených stojánků dle matrice analyzovaného materiálu označený
čárovým kódem. Požadavky analýz se předají do cobas pure on-line přes čárový
kód z LIS a po provedení analýzy se převedou elektronicky zpět. Tyto
výsledky jsou uchovávány v laboratorním systému LIMS fy DS Soft Olomouc.
Kalibrace a návaznost
Ke kalibraci
se využívá přípravek Calibrator for automated systems
(C.f.a.s.) katalogové číslo 10759350190, výrobce ROCHE. Je to lyofilizované kalibrační
sérum na bázi lidského séra. Koncentrace a aktivity byly
vybrány tak, aby zajistily optimální kalibraci automatických analyzátorů,
které nepoužívají kontinuální průtokový systém. Jako nulový kalibrátor je
použita redestilovaná voda.
Návaznost: Tato metoda byla standardizována dle
atomové absorpční spektrometrie.
Frekvence kalibrace: po změně šarže reagencie,
podle požadavků provádění kontroly kvality.
Po opatrném otevření lahvičky, aby se zabránilo
jakékoliv ztrátě lyofilizátu, se přidá přesně 3 ml
redestilované vody. Lahvička se pečlivě
uzavře a obsah se rozpustí během 30 minut, za občasného opatrného
promíchání kroužením lahvičky tak, aby se zabránilo pěnění.
Netřepe se.
Kalibrátor v lyofilizovaném stavuje stabilní do
data uvedeného na obalu. Po rozpuštění jsou složky kalibrátoru
stabilní nejméně 8 hodin při laboratorní teplotě, 2 dny při 4 °C a 1 měsíc při -20 °C, pokud bylo jednou zamraženo. Kalibrátor
byl připraven z krve dárců, testovaných individuálně na
přítomnost HBsAG, HCV a HIV protilátek. Je nutné s ním zacházet dle pravidel o
bezpečnosti práce s biologickým materiálem.
Koncentrace se vybírá v přiloženém atestu ke
kalibrátoru a závisí na šarži a metodě. Kalibrace je jednobodová,
závislost je lineární, přímka prochází počátkem. Kalibrační
faktor se vypočítává pomocí softwaru analyzátoru. Rekalibrace
metody se provádí na základě výsledků kontroly správnosti. Kalibrační
data jsou automaticky archivována v softwaru analyzátoru.
Charakteristika spolehlivosti
Měřící
rozsah: 0,1 – 2,0 mmol/l , měření v séru je lineární v rozsahu 0,10 ‑ 2,0 mmol/l, měření v moči v
rozsahu 0,56 ‑ 11 mmol/l
Vzorky
s vyššími koncentracemi stanovte pomocí funkce rerun. Vzorky ředíme 1:2
pomocí této funkce, ty jsou pak následně automaticky vynásobeny faktorem 2.
Mez detekce: 0,10 mmol/l v séru, v moči 0,56
mmol/l (taktéž mez stanovitelnosti).
Mez detekce
představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly.
Počítá se jako hodnota ležící 3 SD od nulového vzorku (nulový vzorek + 3 SD,
opakovatelnost, n = 30).
Mez
stanovitelnosti je nejnižší koncentrace analytu, kterou lze reprodukovatelně
měřit s celkovou chybou 20 %. Stanovena byla použitím vzorků hořčíku
s nízkými koncentracemi.
Dokumentace, výpočty, zpracování dat a vydávání výsledků
Hodnoty poslední provedené kalibrace se uchovávají v paměti přístroje. V případě potřeby je možné je vytisknout.
Záloha
veškerých primárních dat (kalibrace, kontrolní vzorky, pacientské vzorky)
probíhá na analyzátoru Cobas pure každý den automaticky na flash disk umístěný
v počítači analyzátoru a sekundární data (pacientské vzorky, QC) jsou
zálohovány v LIS taktéž každý den automaticky probíhající zálohou LIS.
Referenční, varovné nebo kritické hodnoty
Referenční hodnoty
fS hořčík (mmol/l) novorozenci:
0,62 – 0,91
5 m. – 6 let: 0,70 – 0,95
6
– 12 let: 0,70 – 0,86
12 – 20 let: 0,70 – 0,91
dospělí (20 - 60 let): 0,66 – 1,07
nad 60
let: 0,66 – 0,99
nad 90 let: 0,70 – 0,95
Interpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášení
Hodnoty se udávají v mmol/l, po kontrole na oddělení. Výsledky se vydávají
v elektronické a i papírové podobě, statimové a kritické výsledky
podléhající hlášení jsou hlášeny telefonicky.
Řízení kvality
Jako
kontrolní materiál se používá PreciControl ClinChem Multi 1 a PreciControl
ClinChem Multi 2 fy ROCHE, lyofilizované kontrolní séra na základě bovinního
albuminu se základními aktivitami v normálním rozmezí. Přidané enzymy zvířecího
původu mají vlastnosti podobné enzymům z lidského séra.
Připravují
se dokonalým rozpuštěním obsahu lahvičky v 5 ml deionizované vody za pomalého
kroužení. Po 5 minutách jsou připraveny k použití, pro stanovení ALP se nechává
stát další 1 hodinu při laboratorní teplotě. Používají se stejným způsobem jako
vzorek, datum exspirace je udáno na každém balení.
Do měření
se zařazují každý den a výsledky jsou vyhodnoceny podle Westgardových pravidel
v analyzátoru v QC modulu a taktéž v LIS v QC modulu.
Veškeré NO v QC jsou zdokumentovány v LIS.
Externí
kontrola kvality v rámci České republiky je organizována SEKK a naše laboratoř
se jí účastní 2-krát do roka v rámci cyklu AKS.
Poznámky, zdroje variability
Jiné související informace
Literatura
·
Uživatelská
příručka Cobas pure
·
Racek, J.
Klinická biochemie, Galén, 2021
·
Richard
Češka a kol.: Interna. 1. Praha: Triton 2010
Appendixy
Autorské poznámky
Doporučení, recenze, schválení
Autoři a spoluautoři: Stanovská
Lenka
Recenze:
Vyjádření:
Revize: