OSN-SAbstraktOSN-E

In vitro test pro kvantitativní stanovení fosforu v séru na systému ROCHE Cobas pure.

 

 

 

OSN-SSeznam souvisejících dokumentů a textů

Uživatelská příručka Roche Cobas pure  

Bezpečnostní list Roche PHOS2

Příbalový leták PHOS2 – cobas pure

OKB PN – SM – 006 Manipulace se vzorky

OKB PN – SM – 009 Práce s biologickým materiálem

OKB PN – SM – 002 Bezpečnost práce

 

 

OSN-SKódy, názvy, definice a terminologieOSN-E

S-fosfor, P, LIS - 59, VZP 81427

Rutinní i statimová metoda, kazeta COBAS Pure Phosphate (Inorganic) ver. 2 (PHOS2) obsahuje diagnostické reagencie určené pro in vitro kvantitativní stanovení koncentrace anorganického fosforu v séru, plasmě a moči systémem COBAS pure, aplikace pro sérum a plazmu (test PHOS2, ID 2099 001) a aplikace pro moč (test PHOSU2), katalogové číslo 08058610190. Souprava obsahuje 750 testů. Souprava je uložena v lednici, místnost biochemie.

 

 

OSN-SPrincip a metoda postupuOSN-E

Molybdenan UV.

Anorganický fosfor reaguje s molybdátem amonným v prostředí kyseliny sírové a vytváří amonium-  fosfomolybdát (NH4)3[PO4(MoO3)12].

 

Zjednodušené schéma:

                                                                        H2SO4

Anorganický fosfor + molybdenan amonný ¾¾¾¾¾¾® amonium – fosfomolybdenan

 

Koncentrace vytvořeného fosfomolybdenanu je přímo úměrná koncentraci anorganických fosfátů a měří se fotometricky.

 

 

OSN-SMísto provádění postupuOSN-EOSN-S OSN-E

Oddělení klinické biochemie PN v Opavě, Olomoucká 88, 749 01 Opava

 

 

OSN-SBezpečnostní aspekty a podmínky prostředíOSN-E

Je nutné dodržovat obecné zásady bezpečnosti práce podle ČSN 01 8003, ale i zásady práce s biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých infekcí. Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit. Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou vodou a mýdlem a ošetřit vhodným reparačním krémem. Při zasažení očí vymývat velkým množstvím vlažné vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a kůže odložit veškeré kontaminované oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým množstvím pokud možno vlažné vody popř. mýdlem nebo jiným vhodným mycím prostředkem. Po umytí ošetřit vhodným reparačním krémem. Při náhodném požití vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vody a vyhledat lékařskou pomoc.

 

 

OSN-SFáze před vyšetřením (příprava pacienta)OSN-E

Většina fosforu obsaženého v lidském těle 88% je přítomna v kostech jako apatit Ca2+[Ca3(PO4)2]32-. Zbývající fosfor lze nalézt v podobě anorganických fosfátů a esterů fosfátů. Vápník a fosfor obyčejně představují protipóly vzájemných vztahů. Nárůst koncentrace jednoho je provázen poklesem koncentrace druhého. Zvýšení hladiny fosforu lze pozorovat při hypervitaminóze vitaminu D, hypoparatyreoidismu a renálním selhání. Snížené hodnoty sérového fosforu se objevují při křivici z deficitu vitaminu D, hyperpara-tyreoidismu a Fanconiho syndromu.

 

 

OSN-SOdběr primárního vzorku (druh, nádobka, transport)OSN-E

Pro odběr a přípravu vzorků používejte pouze vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky.

Sérum: odběr do standardních zkumavek.

Plasma: Li-heparinizovaná, K2-EDTA

Moč: sbírejte do nádoběk bez detergentů. Po sběru okyselte kyselinou chlorovodíkovou.

Sérum lačnících pacientů je upřednostňováno, neboť po jídle jsou nižší hodnoty anorganického fosforu. Sérum a plazma mají být v co nejkratším čase odděleny od krevní sraženiny, aby nedocházelo k difúzi fosfátů z erytrocytů do okolí.

Stabilita séra a plazmy:

1 den při 15 – 25 °C

4 dny při 2 –   8°C.

1 rok při (-15) – (-25°C)

Stabilita moči:

24 hod - je-li během skladování chlazená.

6 měsíců při 2-8 °C (po okyselení)

Speciální příprava pacienta ani dieta není nutná, pro obvyklé vyšetřování je vhodný odběr ráno, na lačno. Odběr se provádí ze žíly.

 

 

OSN-SOmezení (interference a zkřížené reakce)OSN-E

Viz. Příbalový leták PHOS2, str. 2/5.

 

 

 

OSN-SManipulace se vzorkyOSN-E

Podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem.

 

 

OSN-SPřístroje a pomůckyOSN-E

Analyzátor ROCHE Cobas pure, viz. SOPT Cobas pure.

 

 

OSN-SReagencieOSN-E

Souprava obsahuje:

·         činidlo R1 

·         činidlo R3

 

 

Činidla R1 (v pozici B)     

                                                                 Kyselina sírová            0,36 mol/l

                                                     detergent

 

Činidla R3 (v pozici C)     

                                                               

Molybdát amonný               3,5 mmol/l    

Chlorid sodný               150 mmol/l

 Kys. sírová                   0,36 mol/l

 

 

Činidla jsou připravena k použití. Činidla jsou stabilní uzavřené do vyznačené doby exspirace na štítku reagencie a na palubě přístroje po otevření v chlazeném prostoru po dobu 26 týdnů.

 

 

OSN-SSpotřební materiálOSN-E

Microcups typu Hitachi.

 

 

OSN-SPracovní postupOSN-E

Kazetu Cobas pure PHOS2 umístíme do prostoru pro reagencie. Připravíme kontrolní séra, které umístíme do příslušného stojanu do předem definovaných pozic a po ukončení měření QC modul v analyzátoru a také v LIS vyhodnotí výsledky pomocí Westgardových pravidel a určený pracovník, který rozhodne, zda odpovídající analýza může probíhat. Celková koncentrace se zjistí výpočtem podle optimální kalibrační křivky pomocí software analyzátoru.

Stanovení je měřeno při 37 °C při primární vlnové délce A/B 700/340 nm. Při koncentraci vyšší než měřící rozsah je výsledek označen kódem pro opakování měření z naředěného vzorku. Pipetuje se 1,6 µl séra.

 

 

OSN-SStručný popis postupuOSN-E

Obsluha provede kontrolu reagencií, kalibraci metod a následnou kontrolu metod (kontrolu provádí vysokoškolský určený pracovník). Analyzovaný materiál se umístí do určených stojánků dle matrice analyzovaného materiálu označený čárovým kódem. Požadavky analýz se předají do cobas pure on-line přes čárový kód z LIS a po provedení analýzy se převedou elektronicky zpět. Tyto výsledky jsou uchovávány v laboratorním systému LIMS fy DS Soft Olomouc.

 

 

 

OSN-SKalibrace a návaznostOSN-E

Ke kalibraci se využívá přípravek Calibrator for automated systems (C.f.a.s.) katalogové číslo 10759350190, výrobce ROCHE. Je to lyofilizované kalibrační sérum na bázi lidského séra. Koncentrace a aktivity byly vybrány tak, aby zajistily optimální kalibraci automatických analyzátorů, které nepoužívají kontinuální průtokový systém. Jako nulový kalibrátor je použita redestilovaná voda.

Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle NERL primárního referenčního materiálu.

Frekvence kalibrace: po změně šarže reagencie, podle požadavků provádění kontroly kvality.

Příprava

Po opatrném otevření lahvičky, aby se zabránilo jakékoliv ztrátě lyofilizátu, se přidá přesně 3 ml redestilované vody. Lahvička se pečlivě uzavře a obsah se rozpustí během 30 minut, za občasného opatrného promíchání kroužením lahvičky tak, aby se zabránilo pěnění. Netřepe se.

 

Stabilita

Kalibrátor v lyofilizovaném stavuje stabilní do data uvedeného na obalu. Po rozpuštění jsou složky kalibrátoru stabilní nejméně 8 hodin při laboratorní teplotě, 2 dny při 4 °C a 1 měsíc při -20 °C, pokud bylo jednou zamraženo. Kalibrátor byl připraven z krve dárců, testovaných individuálně na přítomnost HBsAG, HCV a HIV protilátek. Je nutné s ním zacházet dle pravidel o bezpečnosti práce s biologickým materiálem.

 

 

 

OSN-SCharakteristika spolehlivostiOSN-E

Měřící rozsah (sérum)                0,1 do 6,46 mmol/l

Vzorky s vyššími koncentracemi stanovte pomocí funkce rerun, vzorky ředíme 1:2 pomocí této funkce a tyto jsou automaticky násobeny 2.

Mez detekce (sérum)                  0,1 mmol/l

Mez detekce představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze odlišit od nuly. Počítá se jako hodnota ležící 3 SD nad nejnižším standardem (standard 1 + 3 SD, opakovatelnost, n=21).

Mez stanovitelnosti (sérum)       0,1 mmol/l

Mez stanovitelnosti je nejnižší koncentrace analytu, kterou lze reprodukovatelně měřit s celkovou chybou 30 %. Stanovena byla použitím vzorků fosfátů s nízkými koncentracemi.

Biologický rozptyl                              - intraindividuální: závislost na pohlaví, kolísání v průběhu dne, nejvyšší hodnoty jsou ve večerních hodinách.

- interindividuální

 

 

 

OSN-SDokumentace, výpočty, zpracování dat a vydávání výsledkůOSN-E

Hodnoty poslední provedené kalibrace se uchovávají v paměti přístroje. V případě potřeby je možné je vytisknout.

Záloha veškerých primárních dat (kalibrace, kontrolní vzorky, pacientské vzorky) probíhá na analyzátoru Cobas pure každý den automaticky na flash disk umístěný v počítači analyzátoru a sekundární data (pacientské vzorky, QC) jsou zálohovány v LIS taktéž každý den automaticky probíhající zálohou LIS.

 

 

 

OSN-SReferenční, varovné nebo kritické hodnotyOSN-EOSN-S OSN-E

Referenční hodnoty:

fS Anorganický fosfor (mmol/l)( na lačno)

dospělí (18-99)                      0,81 - 1,45

 

děti : 1 – 30 dní              M: 1,25 – 2,25     F: 1,40 – 2,50

1 –12 m.                         M: 1,15 – 2,15     F: 1,20 – 2,10

1 – 3 roky                       M: 1,00 – 1,95     F: 1,10 – 1.95

4 – 6 let                          M: 1,05 –1,80      F: 1,05 – 1,80

7 – 9 let:                         M: 0,95 – 1,75     F: 1,00 – 1,80

10 – 12 let                      M: 1,05 – 1,85     F: 1,05 – 1,70

13 – 15 let                      M:  0,95 – 1,65    F: 0,90 – 1,55

16 – 18 let                      M: 0,85 – 1,60     F: 0,80 – 1,55

 

 

OSN-SInterpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášeníOSN-E

Hodnoty se udávají v mmol/l, po kontrole na oddělení. Výsledky se vydávají v elektronické a i papírové podobě, statimové a kritické výsledky podléhající hlášení jsou hlášeny telefonicky.

 

OSN-SŘízení kvalityOSN-E

Jako kontrolní materiál se používá PreciControl ClinChem Multi 1 a PreciControl ClinChem Multi 2 fy ROCHE, lyofilizované kontrolní séra na základě bovinního albuminu se základními aktivitami v normálním rozmezí. Přidané enzymy zvířecího původu mají vlastnosti podobné enzymům z lidského séra.

Připravují se dokonalým rozpuštěním obsahu lahvičky v 5 ml deionizované vody za pomalého kroužení. Po 5 minutách jsou připraveny k použití, pro stanovení ALP se nechává stát další 1 hodinu při laboratorní teplotě. Používají se stejným způsobem jako vzorek, datum exspirace je udáno na každém balení.

Do měření se zařazují každý den a výsledky jsou vyhodnoceny podle Westgardových pravidel v analyzátoru v QC modulu a taktéž v LIS v QC modulu. Veškeré NO v QC jsou zdokumentovány v LIS.

EHK

Externí kontrola kvality v rámci České republiky je organizována SEKK a naše laboratoř se jí účastní 2-krát ročně v rámci cyklu AKS.

 

 

OSN-SPoznámkyOSN-E

 

OSN-SJiné související informaceOSN-E

 

OSN-SLiteraturaOSN-E

·         Příbalový leták PHOS2

·         Uživatelská příručka Cobas pure

·         Racek, J. Klinická biochemie, Galén, 2021

·         Richard Češka a kol.: Interna. 1. Praha: Triton 2010

 

 

OSN-SAppendixyOSN-E

 

 

 

OSN-SAutorské poznámkyOSN-E

 

OSN-SDoporučení, recenze, schváleníOSN-E

Autor a spoluautoři: Stanovská Lenka

Vyjádření:

Revize: