Abstrakt
In vitro test pro kvantitativní stanovení fosforu v séru na systému
ROCHE Cobas pure.
Seznam souvisejících dokumentů a textů
Uživatelská příručka Roche Cobas pure
Bezpečnostní list Roche
PHOS2
Příbalový leták PHOS2 –
cobas pure
OKB PN – SM – 006
Manipulace se vzorky
OKB PN – SM – 009 Práce
s biologickým materiálem
OKB PN – SM – 002
Bezpečnost práce
Kódy, názvy, definice a
terminologie
S-fosfor, P, LIS - 59, VZP 81427
Rutinní i statimová metoda,
kazeta COBAS Pure Phosphate (Inorganic) ver. 2 (PHOS2) obsahuje diagnostické
reagencie určené pro in vitro kvantitativní stanovení koncentrace
anorganického fosforu v séru, plasmě a moči systémem COBAS pure, aplikace
pro sérum a plazmu (test PHOS2, ID 2099 001) a aplikace pro moč (test PHOSU2), katalogové číslo 08058610190. Souprava obsahuje 750 testů. Souprava je
uložena v lednici, místnost biochemie.
Princip a metoda postupu
Molybdenan UV.
Anorganický fosfor reaguje s molybdátem amonným v prostředí kyseliny
sírové a vytváří amonium- fosfomolybdát (NH4)3[PO4(MoO3)12].
Zjednodušené schéma:
H2SO4
Anorganický fosfor + molybdenan amonný ¾¾¾¾¾¾® amonium – fosfomolybdenan
Koncentrace vytvořeného fosfomolybdenanu je přímo úměrná koncentraci
anorganických fosfátů a měří se fotometricky.
Místo provádění postupu
Oddělení klinické biochemie PN v Opavě, Olomoucká 88, 749 01 Opava
Bezpečnostní aspekty a podmínky prostředí
Je nutné dodržovat
obecné zásady bezpečnosti práce podle ČSN 01 8003, ale i zásady práce s
biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých infekcí.
Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné
pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit.
Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou vodou a mýdlem a
ošetřit vhodným reparačním krémem. Při zasažení očí vymývat velkým množstvím
vlažné vody nejméně 15 minut. Při zasažení oděvu a kůže odložit veškeré
kontaminované oblečení. Okamžitě kůži omýt velkým množstvím pokud možno vlažné
vody popř. mýdlem nebo jiným vhodným mycím prostředkem. Po umytí ošetřit
vhodným reparačním krémem. Při náhodném požití vypláchnout ústa, dát vypít asi
1/2 litru vody a vyhledat lékařskou pomoc.
Fáze
před vyšetřením (příprava pacienta)
Většina fosforu obsaženého v lidském těle 88% je
přítomna v kostech jako apatit Ca2+[Ca3(PO4)2]32-.
Zbývající fosfor lze nalézt v podobě anorganických fosfátů a esterů
fosfátů. Vápník a fosfor obyčejně představují protipóly vzájemných vztahů.
Nárůst koncentrace jednoho je provázen poklesem koncentrace druhého. Zvýšení
hladiny fosforu lze pozorovat při hypervitaminóze vitaminu D,
hypoparatyreoidismu a renálním selhání. Snížené hodnoty sérového fosforu se objevují
při křivici z deficitu vitaminu D, hyperpara-tyreoidismu a Fanconiho syndromu.
Odběr primárního vzorku (druh, nádobka, transport)
Pro odběr a přípravu vzorků
používejte pouze vhodné zkumavky nebo odběrové nádobky.
Sérum: odběr do standardních
zkumavek.
Plasma: Li-heparinizovaná, K2-EDTA
Moč: sbírejte do nádoběk bez
detergentů. Po sběru okyselte kyselinou chlorovodíkovou.
Sérum lačnících pacientů je
upřednostňováno, neboť po jídle jsou nižší hodnoty anorganického fosforu. Sérum
a plazma mají být v co nejkratším čase odděleny od krevní sraženiny, aby
nedocházelo k difúzi fosfátů z erytrocytů do okolí.
Stabilita séra a plazmy:
1 den při 15 – 25 °C
4 dny při 2 – 8°C.
1 rok při (-15) – (-25°C)
Stabilita moči:
24 hod - je-li během skladování
chlazená.
6 měsíců při 2-8 °C (po okyselení)
Speciální příprava pacienta ani dieta není nutná, pro obvyklé vyšetřování
je vhodný odběr ráno, na lačno. Odběr se provádí ze žíly.
Omezení (interference a zkřížené reakce)
Viz. Příbalový leták PHOS2, str. 2/5.
Manipulace se vzorky
Podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem.
Přístroje
a pomůcky
Analyzátor ROCHE Cobas pure, viz. SOPT Cobas pure.
Reagencie
Souprava obsahuje:
·
činidlo
R1
·
činidlo R3
Činidla R1 (v pozici B)
Kyselina sírová 0,36 mol/l
detergent
Činidla R3 (v pozici C)
Molybdát amonný 3,5 mmol/l
Chlorid sodný 150 mmol/l
Kys. sírová 0,36 mol/l
Činidla jsou připravena k použití. Činidla jsou stabilní uzavřené do
vyznačené doby exspirace na štítku reagencie a na palubě přístroje po otevření
v chlazeném prostoru po dobu 26 týdnů.
Spotřební
materiál
Microcups typu
Hitachi.
Pracovní postup
Kazetu Cobas pure PHOS2 umístíme do prostoru pro
reagencie. Připravíme kontrolní séra, které umístíme do příslušného stojanu do
předem definovaných pozic a po ukončení měření QC modul v analyzátoru a
také v LIS vyhodnotí výsledky pomocí Westgardových pravidel a určený pracovník,
který rozhodne, zda odpovídající analýza může probíhat. Celková koncentrace se
zjistí výpočtem podle optimální kalibrační křivky pomocí software analyzátoru.
Stanovení je
měřeno při 37 °C při primární vlnové délce A/B 700/340 nm. Při
koncentraci vyšší než měřící rozsah je výsledek označen kódem pro opakování
měření z naředěného vzorku. Pipetuje se 1,6 µl séra.
Stručný popis postupu
Obsluha
provede kontrolu reagencií, kalibraci metod a následnou kontrolu metod
(kontrolu provádí vysokoškolský určený pracovník). Analyzovaný materiál se
umístí do určených stojánků dle matrice analyzovaného materiálu označený
čárovým kódem. Požadavky analýz se předají do cobas pure on-line přes čárový
kód z LIS a po provedení analýzy se převedou elektronicky zpět. Tyto
výsledky jsou uchovávány v laboratorním systému LIMS fy DS Soft Olomouc.
Kalibrace a návaznost
Ke kalibraci se využívá přípravek Calibrator for automated systems
(C.f.a.s.) katalogové číslo 10759350190, výrobce ROCHE. Je to lyofilizované kalibrační
sérum na bázi lidského séra. Koncentrace a aktivity byly
vybrány tak, aby zajistily optimální kalibraci automatických analyzátorů,
které nepoužívají kontinuální průtokový systém. Jako nulový kalibrátor je
použita redestilovaná voda.
Návaznost: Tato metoda byla standardizována podle
NERL primárního referenčního materiálu.
Frekvence kalibrace: po změně šarže reagencie,
podle požadavků provádění kontroly kvality.
Po opatrném otevření lahvičky, aby se zabránilo
jakékoliv ztrátě lyofilizátu, se přidá přesně 3 ml
redestilované vody. Lahvička se pečlivě uzavře a obsah se rozpustí během 30
minut, za občasného opatrného promíchání kroužením lahvičky tak, aby
se zabránilo pěnění. Netřepe se.
Kalibrátor v lyofilizovaném stavuje stabilní do
data uvedeného na obalu. Po rozpuštění jsou složky kalibrátoru
stabilní nejméně 8 hodin při laboratorní teplotě, 2 dny při 4 °C a 1 měsíc při -20 °C, pokud bylo jednou zamraženo. Kalibrátor
byl připraven z krve dárců, testovaných individuálně na
přítomnost HBsAG, HCV a HIV protilátek. Je nutné s ním zacházet dle pravidel o
bezpečnosti práce s biologickým materiálem.
Charakteristika spolehlivosti
Měřící rozsah (sérum) 0,1 do
6,46 mmol/l
Vzorky s vyššími koncentracemi stanovte
pomocí funkce rerun, vzorky ředíme 1:2 pomocí této funkce a tyto jsou
automaticky násobeny 2.
Mez detekce (sérum) 0,1 mmol/l
Mez detekce představuje nejnižší měřitelnou hladinu analytu, kterou lze
odlišit od nuly. Počítá se jako hodnota ležící 3 SD nad nejnižším standardem
(standard 1 + 3 SD, opakovatelnost, n=21).
Mez
stanovitelnosti (sérum) 0,1 mmol/l
Mez stanovitelnosti je nejnižší koncentrace
analytu, kterou lze reprodukovatelně měřit s celkovou chybou 30 %.
Stanovena byla použitím vzorků fosfátů s nízkými koncentracemi.
Biologický rozptyl - intraindividuální: závislost na pohlaví,
kolísání v průběhu dne, nejvyšší hodnoty jsou ve
večerních hodinách.
- interindividuální
Dokumentace,
výpočty, zpracování dat a vydávání výsledků
Hodnoty poslední provedené kalibrace se uchovávají v paměti přístroje. V případě potřeby je možné je vytisknout.
Záloha
veškerých primárních dat (kalibrace, kontrolní vzorky, pacientské vzorky)
probíhá na analyzátoru Cobas pure každý den automaticky na flash disk umístěný
v počítači analyzátoru a sekundární data (pacientské vzorky, QC) jsou
zálohovány v LIS taktéž každý den automaticky probíhající zálohou LIS.
Referenční,
varovné nebo kritické hodnoty
Referenční hodnoty:
fS Anorganický fosfor (mmol/l)( na lačno)
dospělí (18-99) 0,81 - 1,45
děti : 1 – 30 dní M: 1,25 – 2,25 F: 1,40 – 2,50
1 –12 m. M: 1,15 – 2,15 F: 1,20 – 2,10
1 – 3 roky M: 1,00 – 1,95 F: 1,10 – 1.95
4 – 6 let M: 1,05 –1,80 F: 1,05 – 1,80
7 – 9 let: M: 0,95 – 1,75 F: 1,00 – 1,80
10 – 12 let M: 1,05 – 1,85 F: 1,05 – 1,70
13 – 15 let M: 0,95 – 1,65
F: 0,90 – 1,55
16 – 18 let M: 0,85 – 1,60 F: 0,80 – 1,55
Interpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášení
Hodnoty se udávají v mmol/l, po kontrole na oddělení. Výsledky se vydávají
v elektronické a i papírové podobě, statimové a kritické výsledky
podléhající hlášení jsou hlášeny telefonicky.
Řízení kvality
Jako kontrolní materiál se
používá PreciControl ClinChem Multi 1 a PreciControl ClinChem Multi 2 fy ROCHE,
lyofilizované kontrolní séra na základě bovinního albuminu se základními
aktivitami v normálním rozmezí. Přidané enzymy zvířecího původu mají vlastnosti
podobné enzymům z lidského séra.
Připravují se dokonalým rozpuštěním obsahu
lahvičky v 5 ml deionizované vody za pomalého kroužení. Po 5 minutách jsou
připraveny k použití, pro stanovení ALP se nechává stát další 1 hodinu při
laboratorní teplotě. Používají se stejným způsobem jako vzorek, datum exspirace
je udáno na každém balení.
Do měření se zařazují každý den a výsledky jsou
vyhodnoceny podle Westgardových pravidel v analyzátoru v QC modulu a
taktéž v LIS v QC modulu. Veškeré NO v QC jsou zdokumentovány
v LIS.
Externí kontrola kvality v rámci České republiky
je organizována SEKK a naše laboratoř se jí účastní 2-krát ročně v rámci
cyklu AKS.
Poznámky
Jiné související informace
LiteraturaOSN-E
·
Uživatelská
příručka Cobas pure
·
Racek, J. Klinická
biochemie, Galén, 2021
·
Richard
Češka a kol.: Interna. 1. Praha: Triton 2010
AppendixyOSN-E
Autorské poznámky
Doporučení, recenze, schválení
Autor a
spoluautoři: Stanovská Lenka
Vyjádření:
Revize: